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胎牛血清的質量標準及預篩選

點(dian)擊次數(shu):623更新時間(jian):2023-03-13
  雖然我們對胎牛血清的功能清楚,但血清的成分非常復雜,時至今日對其準確的成分、含量及其作用機制仍不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認識。
  
  其(qi)次血(xue)清(qing)都是(shi)批量生產(chan),各批量之間差異很大,而且血(xue)清(qing)保存(cun)期至多(duo)一年,因此(ci),要保證每批血(xue)清(qing)的相似性極為困(kun)難(nan),在細胞培(pei)養中避免不了要做血(xue)清(qing)篩(shai)選(xuan),那如何篩(shai)選(xuan)血(xue)清(qing)呢?
  
  血清(qing)的(de)質(zhi)量標(biao)準(zhun):
  
  1、內毒素標準為不高于5EU/ml。
  
  2、總蛋白含量胎牛血清一(yi)般(ban)范圍是30-40mg/ml,數值偏(pian)高偏(pian)低都會(hui)影響實(shi)驗的(de)正(zheng)常進(jin)行。
  
  3、血(xue)紅蛋白標(biao)準為不(bu)高于20mg/dl。
  
  4、pH。國產血清、大(da)多(duo)高于7.5,進(jin)口胎牛血清,大(da)多(duo)低(di)于7.5,根據(ju)PH的高低(di)可(ke)用來(lai)初步鑒(jian)別血清的來(lai)源。
  
  5、微生物。包(bao)括細(xi)菌(jun)、霉(mei)菌(jun)、支原體、噬(shi)菌(jun)體、各類(lei)病(bing)(bing)原性病(bing)(bing)毒等,大多都能(neng)清(qing)(qing)(qing)除。大腸桿菌(jun)噬(shi)菌(jun)體無(wu)法過濾,很難徹(che)底清(qing)(qing)(qing)除,但對血(xue)清(qing)(qing)(qing)質量(liang)影響(xiang)不大。病(bing)(bing)原性病(bing)(bing)毒,在(zai)國產血(xue)清(qing)(qing)(qing)中(zhong)幾乎(hu)90%以上都存在(zai),是影響(xiang)國產血(xue)清(qing)(qing)(qing)質量(liang)的重要(yao)原因之一(yi)。
  
  在實(shi)際篩(shai)選時,主要從血清外觀(guan)和實(shi)驗操(cao)作(zuo)時細(xi)胞的生長(chang)狀態進行(xing)。
  
  從外觀上(shang):
  
  1、顏色(se):根據血紅蛋白(bai)含量的(de)不同,胎(tai)牛血清可(ke)表現(xian)出(chu)黃色(se)或(huo)紅色(se),這(zhe)個指標的(de)意義在于(yu)能(neng)(neng)體現(xian)出(chu)采血過(guo)程的(de)嚴(yan)謹規范程度。胎(tai)牛血清或(huo)多或(huo)少總有(you)點溶血,因為胎(tai)牛血清凝血功能(neng)(neng)差,紅細胞(bao)容易(yi)破(po)裂;
  
  2、澄清(qing)度:高質量的胎牛血清(qing)由于蛋白和脂類等物質含量低,表現為稀薄、清(qing)淡;
  
  3、血清(qing)(qing)沉淀(dian):血清(qing)(qing)中的沉淀(dian)是由纖維蛋(dan)白的凝聚產生(sheng),對血清(qing)(qing)質量沒(mei)有影響(xiang)(xiang),沉淀(dian)的產生(sheng)原因跟(gen)加(jia)工生(sheng)產方(fang)式、是否(fou)反復凍融密切相(xiang)關,在實驗操作中可(ke)能會(hui)對細(xi)胞觀察產生(sheng)影響(xiang)(xiang)。
  
  從(cong)性(xing)能上:
  
  1、細(xi)胞(bao)形態(tai),在進(jin)行(xing)血(xue)清(qing)篩選時首先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)生長形態(tai)是否產生明顯變(bian)化,以及觀(guan)察(cha)貼(tie)壁細(xi)胞(bao)的(de)貼(tie)壁情(qing)況,細(xi)胞(bao)在不同(tong)血(xue)清(qing)培養中可能會出現(xian)形態(tai)上的(de)差異;
  
  2、倍增時(shi)間(jian),一般情(qing)況下會選擇倍增時(shi)間(jian)短的(de)血清(qing),值得注(zhu)意的(de)是血清(qing)的(de)影響會傳至5代,在進行測試時(shi),先培養五代后進行計倍增時(shi)間(jian)的(de)計算;
  
  3、克(ke)隆(long)形成率,測試(shi)(shi)時一般選50、100、200個細胞(bao)進行平(ping)板克(ke)隆(long)測試(shi)(shi),平(ping)均5d左右換(huan)一次液,兩周后染色計數,對比克(ke)隆(long)形成情況。
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